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一种检测调制乳中酵母β-葡聚糖含量的方法
发布人: 中国农业科学院农产品加工研究所
发布时间: 2021年07月01日
修改时间: 2021年07月01日
关键词:
分类: 加工 > 农产品加工 > 乳制品加工 >
  • 成果介绍
  • 知识产权信息
  • 交易详情
概述:

本发明涉及食品检测技术领域,尤其涉及一种检测调制乳中酵母β-葡聚糖含量的方法,该方法以水为溶剂对待测调制乳样品进行洗涤以除去干扰糖类,然后进行酸水解处理,最后采用GOPOD酶法显色、紫外-可见光分光光度法测定待测样品的吸光值,然后利用酸处理后的葡萄糖标准曲线和C=[(Ax-A0)-b]*1/a*c*0.9*1/m公式计算得到调制乳中β-葡聚糖的含量。该方法具有样品预处理简单,葡萄糖损失小,操作简便,准确性好,精密度高,成本低廉的优势。

技术原理:
目前检测酵母β-葡聚糖的思路在于先用酸或酶处理将β-葡聚糖水解成葡萄糖,再对单糖进行定量检测,经过换算得到β-葡聚糖含量。在对葡聚糖水解处理时,酶法因价格昂贵,限制了其在实验室的推广应用,而酸法水解廉价简便,酸解过程中葡聚糖虽有少量损失但可通过修正加以解决,因此综合来看酸法水解具有操作简单、成本低廉的特点,适合实验室常规检测分析。对单糖进行定量检测的方法主要有GOPOD法,苯酚-硫酸法、刚果红法、高效液相色谱法、气相色谱法、离子交换色谱-脉冲安培法和流动注射FIA荧光法。苯酚硫酸法为非专一性的总糖测定方法,不能排除其他糖类干扰,测定结果误差较大;高效液相色谱法、气相色谱法、离子交换色谱-脉冲安培法和流动注射FIA荧光法虽测定准确性有所提高,但所需仪器昂贵、操作复杂,也不利于在实验室的推广应用。
创新点:
本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷和不足,提供一种准确性好、操作简便、成本低廉的检测调制乳中酵母β-葡聚糖含量的方法。
主要技术指标:
1.一种检测调制乳中酵母β-葡聚糖含量的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)待测样品预处理取待测样品,以水为溶剂对其进行浸提以除去其他糖分;酸法水解浸提后的样品,得待测样品水解液备用;(2)对待侧样品进行测定向所述待测样品水解液中加入GOPOD酶,显色后,采用紫外-可见分光光度法进行测定,得吸光度数值;(3)绘制葡萄糖标准工作曲线采用与步骤(1)相同的酸法水解方法对葡萄糖标准品进行处理,并向所得溶液中加入水,配制成不同浓度梯度的标准溶液,最后向所述标准溶液中加入GOPOD酶,显色后,采用与步骤(2)相同的紫外-可见分光光度法测定各标准溶液的吸光度,以所述标准溶液的浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准工作曲线,得回归方程;(4)计算待测样品中酵母β-葡聚糖含量采用如下公式计算待测样品中酵母β-葡聚糖含量:C=[(Ax-A0)-b]*1/a*c*0.9*1/m其中,C为调制乳中酵母β-葡聚糖含量,单位:mg/kg调制乳;Ax为待测样品的吸光度值;A0为以水为空白的吸光度值;c为待测样品溶液稀释倍数;0.9为葡萄糖与葡聚糖换算系数;m为待测样品的质量,单位:g;a为回归方程的斜率;b为回归方程的截距;所述浸提操作具体为:于4000-10000rpm条件下离心待测样品10-30min,弃掉上层液体;按照料液比1:10-1:25,向所得样品中加入超纯水,于60-100℃下浸提20-60min,趁热离心,弃掉上层液体后重复浸提、离心步骤2-6次,直至上层液体中不含干扰糖;步骤(1)中,所述酸法水解为:先用质量分数为60-75%的浓硫酸对浸提处理后的待测样品进行浓酸水解,然后再用浓度为1-3mol/L的稀硫酸对浓酸水解后的样品进行稀酸水解。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述浓酸水解在常温下进行,和/或,所述稀酸水解在60-100℃进行。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述酸法水解的具体操作为:向待测样品中加入质量分数为60-75%的浓硫酸,于室温下水解2-4h;然后加入水使硫酸浓度达到1-3mol/L,于60-100℃水解1-5h,调节pH值为6-8,即得。4.根据权利要求1~3任一项所述的方法,其特征在于:所述标准工作曲线的线性范围为0.2-15μg/mL。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述不同浓度梯度分别为0.5μg/mL,1μg/mL,2μg/mL,4μg/mL,8μg/mL,12μg/mL。6.根据权利要求1~3或5任一项所述的方法,其特征在于:所述紫外-可见分光光度法采用500-520nm吸收波长进行检测。
节本增效情况:
本发明采用先浓硫酸降解,再稀硫酸水解的方法对β-葡聚糖进行降解,其中,浓酸水解能够破坏葡聚糖的三股螺旋结构被,致使更多的葡糖残基暴露于溶液相,增大其其水合程度,有助于其更好地分散于溶液中,形成一种微溶胶态,确保酸解效果;在浓酸水解的基础上继续进行稀酸水解,能够进一步彻底水解葡聚糖为葡萄糖。与采用单一浓度的酸解法相比,本发明先用浓酸再用稀酸水解的方法,具有葡聚糖的酸解损失小,回收率高的特点,能够确保检测结果的精准度。同时,与现有常用的混合酶法水解相比,还具有成本低、易于推广的优势。
市场应用前景:
β-葡聚糖是酵母细胞壁的主要成分之一,约占其干重的30-60%,分子主链以β-1.3-糖苷键结合,支链以β-1.6-糖苷键结合。大量研究表明,酵母β-葡聚糖独特的三股螺旋结构使其具有独特的生理功效,如抗肿瘤、增强机体免疫力等,在食品工业中酵母β-葡聚糖还可作为增稠剂、脂肪替代品等。美国、中国和欧盟先后批准了酵母β-葡聚糖在食品工业的应用,近年来国内乳品工业愈发关注酵母β-葡聚糖在乳品中的应用,以满足消费者对营养健康的追求,并且改善乳品品质。由于目前国内尚未有乳品中酵母β-葡聚糖定量检测方法的国家和行业标准,为规范市场秩序、保障公平竞争,对建立一种准确性好、精密度高且操作简便、成本低廉的乳品中酵母β-葡聚糖定量检测方法产生了迫切需求。
适宜条件(领域、区域):
所有乳制品产业领域均可适用。
  • 成果成熟度:可以量产
  • 成熟度说明:可以实际应用,该方法具有样品预处理简单,葡萄糖损失小,操作简便,准确性好,精密度高,成本低廉的优势。
  • 转化条件及成果应用事项:经双方协议许可
  • 预期交易方式:许可转让